友康生物
2025-03-10
公司热点无菌检测中的常见问题有哪些？
1、微生物检测实验qPCR法中，为什么要设置多种不同类型的对照？这些对照分别有什么作用？
在微生物检测实验的qPCR法里，常见的对照有阳性对照、阴性对照、无模板对照、内参对照，这几种对照各有其用：
（1）阳性对照
阳性对照：就像考试里的标准答案。它是已知含有目标微生物核酸的样本，用来证明整个检测系统是正常工作的。如果它检测出来是阳性，那就说明检测方法、仪器、试剂等都没啥问题，能准确检测出目标微生物。要是它没显示阳性，那可能是检测过程出了岔子，比如试剂失效、仪器故障等，得排查原因。
（2）阴性对照
阴性对照：相当于空白试卷。一般是选取没有目标微生物的样本，像同类型无污染样品或者PCR稀释液。它的作用是看看检测过程中有没有受到外来微生物核酸的污染。要是阴性对照检测出阳性，那就说明实验过程被污染了，比如操作环境不洁净、耗材带菌等，这样测出来的其他样本结果也不可信，得重新做。
（3）无模板对照
无模板对照：类似不写答案的试卷。它里面没有加任何样本核酸，只有反应液等试剂。主要是检测试剂本身有没有被目标微生物核酸污染。要是它检测出阳性，那就说明检测试剂被污染了，得换干净的试剂重新检测。
（4）内参对照
内参对照：好比考试里的参考标准。在样本处理时加入，贯穿整个检测过程。它可以监控样本提取、反应体系等环节是不是正常，还能校正实验中的一些误差，比如不同样本在提取核酸效率上的差异等，让检测结果更可靠、更准确。
2、在微生物检测实验的qPCR法里，ROX通道、FAM通道和HEX通道有什么区别？
在微生物检测实验的qPCR法里，ROX通道、FAM通道和HEX通道主要有以下区别：
（1）检测对象不同
FAM通道：就像个 “目标小侦探”，专门用来检测目标微生物的荧光信号。比如在检测支原体的实验里，它负责找出支原体的荧光信号，来判断样品里有没有支原体。
HEX通道：类似 “内部监督员”，主要检测内控对照的荧光信号。内控对照是用来监测整个qPCR反应是不是正常进行的。要是它的信号不对，可能说明实验过程出问题了，比如DNA抽提没做好或者qPCR反应受到抑制。
ROX通道：通常作为 “校准小助手”，用于校正荧光信号。因为在qPCR 实验中，不同反应管之间可能会有一些细微差异，ROX通道的荧光信号可以帮助校准这些差异，让检测结果更准确。
（2）荧光特性不同
它们所使用的荧光基团不一样，发出的荧光颜色和波长也有差别。FAM、HEX、ROX分别对应不同的荧光特性，这也是仪器能区分它们信号的原因。在实验里，仪器会根据这些不同的荧光特性，分别去检测和分析对应通道的信号，从而得到不同的检测信息。
3、无菌检测结果怎么判断？
以友康生物自研的细菌检测试剂盒（qPCR 法）为例进行结果分析，本试剂盒使用两种荧光探针，FAM通道特异性检测细菌，ROX通道检测内质控。
本试剂盒设置阳性质控、阴性对照和无模板对照作为质控，阳性质控、阴性对照和无模板对照判定结果应满足表1的判定结果后，才能对待测样本进行结果判定；如结果与表1不符，待测样本的判定结果不可靠，需要分析原因后重新安排检测。
表1质控结果判定
表2待测样本结果判定
数据均为2复孔检测结果，2复孔结果同时满足表2条件，可依表2做结果判定。
表3异常结果判定
*增加样本处理量推荐进行10倍浓缩后提取检测。
*如遇特殊样品或其他异常现象，结果难以判读，请联系友康生物，咨询具体解决方案。
*如果样本单孔检测，可依据表1、2及表3复孔1进行结果判定。
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