杂交瘤细胞无血清培养基

用途与描述

1、杂交瘤细胞无血清培养基可用于小鼠杂交瘤细胞的培养。一般不需驯化，可直接转入杂交瘤细胞无血清培养基中。
2、杂交瘤细胞无血清培养基也可用于大鼠及仓鼠杂交瘤细胞培养，但一般需要驯化，方可适应无血清的培养环境。
3、杂交瘤细胞无血清培养基中蛋白含量低，有利于表达抗体的纯化。
4、杂交瘤细胞无血清培养基内毒素低于0.25EU/mL，减少了腹水条件下困难的内毒素去除操作。
5、三种适合不同生产用量的配套工艺（摇瓶、透气袋、生物反应器）

杂交瘤细胞是将免疫的小鼠脾淋巴细胞（B细胞）与小鼠骨髓瘤细胞融合在一起，该细胞既具备细胞能够产生特异性抗体的特性，又具备肿瘤细胞能够无限传代（永生性）的特点。因此通过杂交瘤细胞的不断传代，就会得到所需种类的单克隆抗体。

主要成分

杂交瘤细胞无血清培养基主要成分：氨基酸，无机盐，人白蛋白，转铁蛋白，胰岛素，微量元素等。

实验数据

一、杂交瘤细胞不同培养方式细胞数量与抗体产量对照表（1号细胞株）

静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度7.0x104/mL。连续7天不换液培养。
摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度7.0x104/mL。连续7天不换液培养。

二、杂交瘤细胞不同培养方式细胞数量与抗体产量对照表（2号细胞株）

静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度4.0x104/mL。连续7天不换液培养。
摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度4.0x104/mL。连续7天不换液培养。

三、三种适合不同生产用量的配套工艺（摇瓶、透气袋、生物反应器）的培养数据

1、培养瓶静态培养数据

1号细胞株

培养瓶静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度3.5x105/mL。连续7天不换液培养。

培养瓶静态细胞峰值：1.282x106/mL
培养瓶静态抗体峰值：329.5mg/L（检测方法：小鼠IgG  Elisa检测）

2号细胞株

培养瓶静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度2.6x105/mL。连续7天不换液培养。

培养瓶静态细胞峰值：1.335x106/mL
培养瓶静态抗体峰值：390mg/L（检测方法：小鼠IgG  Elisa检测）

2、摇瓶培养数据

1号细胞株

摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度7x10⁴/mL。连续7天不换液培养。

摇瓶细胞峰值：2.185x10⁶/mL
摇瓶抗体峰值：510mg/L（检测方法：小鼠IgG  Elisa检测）

2号细胞株


摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度4x10⁴/mL。连续7天不换液培养。

摇瓶细胞峰值：1.588x10⁶/mL
摇瓶抗体峰值：521mg/L（检测方法：小鼠IgG  Elisa检测）


3、2L培养袋培养数据（静态培养）

1号细胞株

培养袋静态培养条件：2L培养袋，1L培养基。接种密度3.4x105/mL。连续9天根据密度补液培养。

培养袋细胞峰值：2.542x106/mL
培养袋抗体峰值：480.3mg/L（检测方法：小鼠IgG  Elisa检测）

2号细胞株

培养袋静态培养条件：2L培养袋，1L培养基。接种密度2.0x105/mL。连续9天根据密度补液培养。

培养袋细胞峰值：2.170x106/mL
培养袋抗体峰值：522.5mg/L（检测方法：小鼠IgG  Elisa检测）

四、与现有国外品牌的部分对照数据

细胞密度方面：Yocon培养基最高细胞密度为1.282x106/mL，*****培养基最高细胞密度为1.370x106/mL。最高细胞密度确实差异不大。
细胞倍增时间方面：Yocon培养基第2天即达到了细胞密度峰值，*****培养基第3天达到细胞密度峰值。细胞倍增时间差异显著。

抗体表达方面：
1号细胞株。Yocon小鼠IgG抗体表达量峰值为329.5mg/L，相比*****的240.0mg/L。多出37%。差异明显。     

【杂交瘤细胞无血清培养基   使用前特别提示】 

1. 杂交瘤细胞无血清培养基的使用方法与血清培养基及血清替代物培养基相比，确有差别。

敬请用户仔细查看杂交瘤细胞无血清培养基产品使用说明书后操作，请勿仅以既往经验使用本产品。
与血清培养基相比，本产品在培养某些杂交瘤细胞时，需提前进行驯化。

1) 对于采用血清及血清替代物培养的杂交瘤细胞，在初次使用Yocon 杂交瘤细胞无血清培养基时，为防止培养环境的剧烈变化对
细胞造成的损伤，需要对细胞进行驯化操作。
首次更换为Yocon 杂交瘤细胞无血清培养基时，需要在其中添加原培养方法中等量的血清或者替代物。在此后的两次细胞传代中，
依次减半血清或者替代物的浓度。第三次传代，直接离心取上清，更换为Yocon 杂交瘤细胞无血清培养基，完成驯化过程。
2) 对于采用无血清培养基培养的杂交瘤细胞，可以直接更换为本产品进行换液和传代操作，无需经历驯化过程。

2. 使用培养基静态培养和动态培养的不同之处

静态培养：如客户静态培养，可直接使用本培养基，无需做任何处理
动态培养：如客户动态培养，需额外添加0.1%PLURONIC F-68，防止在搅拌培养中，剪切力对细胞的损伤。如未添加防剪切力
保护剂，细胞生长不佳，甚至死亡。